Лада двигатели: Двигатели ВАЗ — список моделей и модификаций

Двигатели Лады Веста: сравнительный обзор

Характеристики/Двигатели	ВАЗ 11186	ВАЗ-21127	Nissan HR16DE / h5M
Годы выпуска	(2011 – наши дни)	(2013 – наши дни)	2006-н.в.
Материал блока цилиндров	чугун	чугун	алюминий
Система питания	инжектор	инжектор	инжектор
Тип	рядный	рядный	рядный
Количество цилиндров	4	4	4
Клапанов на цилиндр	2	4	4
Ход поршня	75,6мм	75,6 мм	83. 6
Диаметр цилиндра	82мм	82 мм	78
Степень сжатия	10,5	нд	09.май
Объем двигателя	1596 см. куб.	1596 см. куб.	1598
Мощность	87 л.с. /5100 об.мин	106 л. с. /5800 об.мин	110-117/6000
Крутящий момент	140Нм/3800 об.мин	148Нм/4000 об.мин	153/4400
Топливо	АИ95	АИ95	95
Расход  топлива, л/100 км	город  8,5л. | трасса 5,7 л. | смешанн. 7,2 л/100 км	город — | трасса — | смешанн. 7 л/100 км	город 8. 9 | трасса 5.7 | смешан. 6.9
Расход масла	50 г/1000 км	50гр/1000км	до 500 гр./1000 км
Вес двигателя	115 кг	115 кг	н.д.
Масло в двигатель	5W-30, 5W-40, 10W-40, 15W40	5W-30, 5W-40, 10W-40, 15W40	0W-20, 5W-30
Масла в двигателе	3. 5 л.	3,5л.	4.6л
При замене лить	3.2 л.	3-3,2л.	4.3л
Ресурс двигателя
По данным завода	200 тыс. км	200 тыс. км	н.д.
На практике	нет данных	200 тыс. км	250+ тыс. км
Тюнинг
Потенциал	180+ л.с.	400+ л.с.	150+ л.с.
Без потери ресурса	до 120 л.с.	120 л.с.	~125 л.с.
Двигатель устанавливался на	Лада Гранта, Лада Калина 2, Лада Приора, Лада Веста	Лада Приора, Лада Калина 2, Лада Гранта, Лада Веста	Nissan Note, Nissan Tiida, Nissan Qashqai, Nissan Juke, Nissan Micra, Nissan Wingroad, Nissan Cube, Nissan Bluebird Sylphy, Nissan Latio, Nissan Grand Livina, Nissan Versa, Nissan NV200, Lada Vesta

ВАЗ портал.

Новые двигатели на ВАЗ. Цена в Тольятти, Москве, Питере. Характеристики, вес, мощность и тд Обзор автомобиля Citroen C5

Citroen C5 относится к легковым автомобилям среднего класса (сегмент D). Автомобиль пошел в производство в 2001 году как преемник модели Xantia. После того, как производство модели C6 было прекращено, Citroen C5 стал флагманом в предложении французского концерна. Название всей серии автомобилей Citroen «C» происходит от легендарного модельного ряда «C», который французы производили в конце 1920-х годов.

(далее…)

Что может означать неприятный запах от автомобильного кондиционера?

Неприятные запахи в автомобиле не только ухудшают комфорт пользователей и отвлекают водителя, но также могут способствовать развитию респираторных заболеваний. К тому же машину с затхлой атмосферой очень сложно продать. Почему воздух из кондиционера иногда бывает несвежим и как этого избежать?

(далее…)

Suzuki sx4

Чтобы выдержать суровое впечатление от внедорожника SX4, местный дистрибьютор превзошел самого себя, когда дело дошло до технических характеристик. Он поставляется с рейлингами на крыше, черными резиновыми полосами на колесных арках и блестящими накладками на передней кромке бамперов. Установленные на заводе 16-дюймовые легкосплавные диски обтянуты высокими шинами 60-й серии.

(далее…)

Внутренняя отделка бани: потолок, стены и освещение

Баня — место, где отдыхает душа и тело человека, вот почему приобретая участок, мы, в первую очередь, думаем о строительстве бани. Внутренней отделке бани стоит уделить особое внимание, и не только потому, что она создает атмосферу и настроение.

Баня — это помещение пожароопасное и любые ошибки в отделке и электропроводке могут привести к возгоранию. Внутренняя отделка бани — дело ответственное и лучше доверить его профессионалам.

(далее…)

Volkswagen Caddy: отличный семейный автомобиль

Новый Volkswagen Caddy может стать идеальной альтернативой семейному универсалу.

История Volkswagen Caddy довольно запутана. Первое поколение под этим названием было пикапом на базе Golf I. Тогда это был еще не Caddy, а Rabbit Pickup, созданный для нужд североамериканского рынка (в США Golf назывался Rabbit). Только четыре года спустя, в 1983 году, автомобиль вышел на европейский рынок, и тогда появилось название Caddy. Эта модель производилась в Уэстморленде, Пенсильвании, Сараево, а затем до 2007 года в Южной Африке. 

(далее…)

Способы полировки автомобилей и процесс ручной полировки

Автомобили, несомненно, являются наиболее часто используемым средством передвижения, ведь это прежде всего удобство. Однако владелец должен помнить, что если хочет, чтобы железный конь прослужил как можно дольше, необходимо правильно за ним ухаживать. Основное занятие — мытье машины. Однако одной лишь чистки недостаточно, чтобы автомобиль выглядел элегантно и был хорошо защищен от внешних факторов. Не менее важна восстановительная полировка автомобиля.
(далее…)

Покупка титанового проката

Компания «Промтитан» производит и реализует изделия их титана: продукция выпускается по чертежам. (далее…)

AUTO BILD България / Страницата не е открита

Марка Избери9ffACACMAbarthAcuraAixamAlfa RomeoAlpinaAlpineAmphicarAriel MotorArtegaAspidAston MartinAudiAustinAutobianchiAuverlandBMWBYDBaicBedfordBellierBentleyBolloréBorgwardBrillianceBugattiBuickCMCCadillacCaravans-WohnmCasaliniCaterhamChangheChatenetCheryChevroletChryslerCitroenCityELCorvetteCupraDAFDFSKDR MotorDS AutomobilesDaciaDaewooDaihatsuDaimlerDangelDe TomasoDe la ChapelleDerwaysDodgeDonkervoortDuttonEstrimaFISKERFerrariFiatFordGAZGEMGEMBALLAGMCGac GonowGalloperGilletGiotti VictoriaGoupilGreat WallGrecavHUMMERHaimaHamannHavalHondaHurtanHyundaiIZHInfinitiInnocentiIso RivoltaIsuzuIvecoJaguarJeepKTMKiaKoenigseggLDVLadaLamborghiniLanciaLand RoverLexusLifanLigierLincolnLotusMANMGMINIMP LaferMPM MotorsMahindraMansoryMartin MotorsMaseratiMaxusMaybachMazdaMcLarenMelexMercedes-BenzMicrocarMinautoMitsubishiMitsuokaMorganMoskvichNissanOldsmobileOldtimerOpelOthersPGOPaganiPanther WestwindsPeugeotPiaggioPlymouthPolestarPontiacPorscheProtonPuchQorosQvaleRAMRegisReliantRenaultRolls-RoyceRoverRufSEATSaabSantanaShuanghuanSkodaSpeedArtSpykerSsangYongStreetScooterSubaruSuzukiTECHARTTVRTalbotTassoTataTazzari EVTeslaTown LifeToyotaTrabantTrailer-AnhängerTriumphTrucks-LkwUAZVAZVEMVanderhallVolkswagenVolvoWartburgWestfieldWiesmannZAZZastavaZhidouZotyee. GOsmartМодел Цена от 1.0002.0003.0004.0005.0006.0007.0008.0009.00010.00012.00014.00016.00018.00020.00022.00024.00026.00028.00030.00035.00040.00045.00050.00060.00070.00080.00090.000Над 100Цена до 1.0002.0003.0004.0005.0006.0007.0008.0009.00010.00012.00014.00016.00018.00020.00022.00024.00026.00028.00030.00035.00040.00045.00050.00060.00070.00080.00090.000Над 100Произведена от 2020201920182017201620152014201320122011201020092008200720062005200420032002200120001999199819971996199519941993199219911990198919881987198619851984198319821981198019791978197719761975197419731972197119701969196819671966196519641963196219611960195919581957195619551954195319521951195019491948194719461945194419431942194119401939193819371936193519341933193219311930192919281927192619251924192319221921192019191918191719161915191419131912Произведена до 2020201920182017201620152014201320122011201020092008200720062005200420032002200120001999199819971996199519941993199219911990198919881987198619851984198319821981198019791978197719761975197419731972197119701969196819671966196519641963196219611960195919581957195619551954195319521951195019491948194719461945194419431942194119401939193819371936193519341933193219311930192919281927192619251924192319221921192019191918191719161915191419131912Държава ВсичкиБелгияГерманияИспанияИталияЛюксембургФранцияАвстрияХоландияПробег до 15. 00030.00045.00060.00075.00085.000100.000125.000150.000180.000200.000Гориво Автогаз (LPG)БензинДизелЕлектрическиЕлектрически-БензиновЕлектрически-ДизелМощност до (kW) 5060708090100110120150170190200220250290 Търсене

Шаг кинезина рассечен с помощью одномоторного FRET

Abstract

Моторный белок Kinesin-1 управляет внутриклеточным транспортом по микротрубочкам, при этом каждый из двух его моторных доменов совершает шаги длиной 16 нм поочередно. То, как двигается одномоторный домен во время шага, неизвестно. Здесь мы используем резонансный перенос энергии Ферстера (FRET) между флуоресцентными метками на обоих моторных доменах одного кинезина. Этот подход позволяет нам определить относительное расстояние между моторными доменами и их относительную ориентацию в субмиллисекундной шкале времени во время процессивного шага.Мы наблюдаем переходы между высокими и низкими значениями FRET для определенных конструкций кинезина, в зависимости от расположения меток. Эти результаты показывают, что во время шага моторный домен кинезина пребывает в четко определенном промежуточном положении в течение ≈3 мс.

Обычный кинезин, Kinesin-1, управляет внутриклеточным транспортом везикул и органелл по микротрубочкам (MT) (1). В результате согласованного действия двух идентичных моторных доменов кинезин перемещается с шагом 8 нм, гидролизуя один АТФ за шаг (2).Скорость мотора зависит от АТФ, соответствует кинетике Михаэлиса-Ментен и составляет 600-800 нм / с при насыщающих концентрациях АТФ, что соответствует ≈10 мс на шаг. Двигательные домены шагают по принципу «из рук в руки», каждый в свою очередь перемещается на 16 нм (3–5). Кинезин — это процессивный мотор, который делает сотни шагов, прежде чем отсоединиться от МТ. Считается, что процессивность достигается за счет удержания циклов АТФ-гидролиза обоих моторных доменов в противофазе с помощью стробирующего механизма, работающего через натяжение связи между двумя моторными доменами (6, 7).Не до конца понятно, предотвращает ли стробирование связывание АТФ с ведущим моторным доменом, высвобождение АДФ из замыкающего домена или и то, и другое (6, 8). Напряжение также может потребоваться для высвобождения замыкающего, связанного с ADP моторного домена из MT (6, 7).

Пошаговое движение происходит между конфигурациями с обоими моторными доменами, прочно связанными с МТ и на расстоянии 8 нм друг от друга, состояние «две головы-связанные», которое наблюдалось в одномоторном резонансном переносе энергии Фёрстера (FRET) (9) и флуоресцентные поляризационные исследования (10).Не очень хорошо известно, что происходит во время шага между двумя последующими двумя состояниями, связанными с головой, и какую долю времени моторные домены проводят в такой конфигурации. При высоких концентрациях АТФ эксперименты по оптическому улавливанию с временным разрешением 50 мкс показали, что шарик, прикрепленный к хвосту кинезина, совершает мгновенные шаги, и никакие промежуточные соединения не могут быть разделены (11). Однако подэтапы были предсказаны на основе моделей механизма кинезина (12). При низких концентрациях АТФ кинезин проводит значительное время в «состоянии ожидания АТФ», прежде чем сделать шаг. В этом состоянии один моторный домен связан с МТ и «ожидает» АТФ, тогда как положение другого моторного домена, содержащего АДФ, в настоящее время обсуждается. Некоторые исследования показали, что последний моторный домен связан с МТ, аналогично состоянию с двумя головами (5, 10, 13). Напротив, совсем недавно на основании данных электронной микроскопии было предложено, что связанный с АДФ моторный домен состыкован с безнуклеотидным доменом и расположен немного впереди (14). В другом исследовании с использованием одномолекулярного FRET, АДФ-связанный моторный домен также предлагалось не присоединяться к МТ, а позади безнуклеотидного домена (9).В этом последнем исследовании, которое имело временное разрешение 10 мс, такое состояние одной головы не было обнаружено при физиологических насыщающих концентрациях АТФ. До сих пор отсутствовали эксперименты, которые могли бы напрямую разрешить движение отдельных двигательных доменов в субмиллисекундной шкале времени во время процессивного движения. Здесь мы применяем анализ одномоторной подвижности, сочетающий конфокальную флуоресцентную микроскопию (15) с FRET для достижения этого временного разрешения.

Результаты

Чтобы определить изменения расстояния между моторными доменами кинезина с помощью FRET, мы создали четыре гомодимерных кинезиновых конструкции с одиночными остатками цистеина в разных положениях на обоих моторных доменах (рис.1). К этим цистеинам мы присоединили Alexa Fluor 555 в качестве донора и Alexa Fluor 647 в качестве акцепторного флуорофора. Эта пара FRET имеет расстояние Ферстера 5,1 нм (молекулярные зонды). Мы ожидали, что FRET не будет происходить для меченых донорно-акцепторных кинезинов, когда оба моторных домена связаны с последующими сайтами связывания на расстоянии 8 нм друг от друга. FRET, однако, может встречаться в потенциальном промежуточном продукте только с одним доменом, связанным с МТ, а другим — ближе (Fig. 1 A ). Мы выбрали конструкции с цистеинами в позиции 324, 215, 43 или 149 (рис. 1 B ), поскольку сообщалось, что эти конструкции являются функциональными (16), что мы подтвердили их неизменной скоростью и процессивностью. FRET измеряли ранее с использованием аналогичной конструкции 324 (9).

Рисунок 1.

Схематическое изображение кинезиновых конструкций и анализа одномоторной конфокальной флуоресцентной микроскопии. ( A ) Два моторных домена кинезина (код PDB 2kin) в двух моторных доменах, связанных с МТ, слишком далеко друг от друга для FRET, и потенциальный промежуточный продукт с моторными доменами, достаточно близкими для FRET.Серые кружки представляют собой одну протофиламент MT, плюс-конец направлен вверх. Зеленая, оранжевая, красная и черная стрелки представляют свет возбуждения, излучение донора, излучение акцептора и FRET, соответственно. ( B ) Четыре позиции, куда вводили цистеины для специфической маркировки (зеленые сферы). ( C ) Экспериментальный анализ с флуоресцентно меченным кинезином, приземляющимся на MT и проходящим через конфокальный объем (оранжевый), где он определяет профиль интенсивности возбуждения гауссовой формы (зеленая кривая). Рисунок не в масштабе; FWHM профиля составляет ≈250 нм, что соответствует ≈30 ступеням кинезина.

Для обнаружения короткоживущих ступенчатых промежуточных продуктов требуется одномоторный флуоресцентный анализ с субмиллисекундным временным разрешением, поскольку ступенчатый цикл кинезина занимает в среднем ≈12 мс при насыщающих концентрациях АТФ (17). Чтобы преодолеть ограниченное временное разрешение подходов к широкопольной флуоресценции (18), мы разработали анализ конфокальной флуоресцентной микроскопии, позволяющий измерять флуктуации интенсивности флуоресценции на ходячих кинезинах во временных масштабах вплоть до 100 мкс (15).Здесь мы используем этот анализ для измерения вариаций эффективности FRET путем размещения сфокусированного лазерного луча на МТ и сбора фотонов, испускаемых одним двигателем с маркировкой, проходящим через него (рис. 1 C ). Фотоны разделяются по длине волны на два канала, детектируются и маркируются по времени с точностью до 12,5 нс. Из-за постоянной скорости двигателя и гауссова профиля возбуждения его временной график интенсивности флуоресценции имеет гауссову форму (рис. 2 A и D и рис. S1 A и D ).Ширина этого гауссиана является прямой мерой скорости кинезина (15). Интенсивности флуоресценции донора и акцептора напрямую отражают стехиометрию мечения. Мы ограничили наш анализ событиями, возникающими из кинезинов, меченных одним донором и одним акцептором, и которые могут быть хорошо согласованы с гауссианой [во многих случаях усеченной фотообесцвечиванием, присоединением или отсоединением мотора от МТ в конфокальном пятне (15). )]. На временных графиках A215C и S149C, полученных при насыщающей концентрации АТФ (2 мМ), интенсивность акцептора намного ниже, чем интенсивность донора, тогда как оба сигнала имеют одинаковую интенсивность в следах T324C и S43C (рис.2 и рис. S1). Кроме того, флуктуации интенсивности кажутся антикоррелированными для этих двух последних конструкций. Чтобы выяснить, связаны ли эти наблюдения с тем, что FRET встречается только в последних конструкциях, мы рассчитали кажущуюся эффективность FRET (интенсивность акцептора, деленная на сумму интенсивностей донора и акцептора; рассчитано только для ограниченного количества временных следов, на которые не повлияла фотография. обесцвечивание или посадка в центральной 200 мс). Эффективность T324C и S43C показывает две популяции (рис.2 B и рис. S1 B ). Напротив, для A215C и S149C можно выделить только одну популяцию (рис. 2 E и рис. S1 E ), аналогичную по эффективности популяции с низким FRET для T324C и S43C. В редких случаях, когда акцептор фотообесцвечивался, мгновенное падение акцепторного сигнала сопровождалось повышением донорного сигнала для T324C и S43C, но не для A215C (рис.2 C и F и рис. S1 C ; обратите внимание, что эти события были получены при концентрациях АТФ, отличных от 2 мМ).Взятые вместе, эти результаты показывают, что во время процессивного движения кинезины T324C и S43C переключаются между состояниями низкого и высокого FRET. Напротив, для конструкций A215C и S149C не наблюдается состояния с высоким FRET.

Рис. 2.

FRET наблюдается для меченного донором акцептора кинезина T324C, но не для A215C. Концентрация АТФ: 2 мМ, если не указано иное ( C и F ). ( A ) График интенсивности флуоресценции T324C, разбитый на интервалы более 10 мс, показывает большие колебания.Черный — интенсивность флуоресценции донора; красный — интенсивность флуоресценции акцептора. ( B ) Гистограмма кажущейся эффективности FRET для T324C [I _A / (I _A + I _D ), с интервалом более 2 мс, центральные 200 мс для 6 событий (другие события не учитывались. для этого анализа, потому что на них повлияло приземление или фотообесцвечивание в пределах этого временного интервала)], показывающие два пика (при эффективности FRET 0,353 ± 0,009 и 0,59 ± 0,01, полученной из двойного гауссова подбора). ( C ) График интенсивности одного события T324C.Зеленые линии представляют собой глобальные подгонки с двумя гауссианами (один для донорного и один для акцепторного канала) с общей шириной, смещением и центральным положением, а также с шагом амплитуды в момент фотообесцвечивания акцептора. Подгонка амплитуд показывает, что после фотообесцвечивания акцептора (при ≈2,2 с) интенсивность донора увеличилась в 2,6 ± 0,2 раза. Для этого графика концентрация АТФ составляла 20 мкМ. ( D ) График интенсивности флуоресценции A215C. Колебания интенсивности кажутся меньше, чем у A .( E ) Гистограмма кажущейся эффективности FRET для A215C (5 событий). Наблюдается только один пик, соответствующий низкому FRET в B (эффективность FRET = 0,325 ± 0,003). ( F ) График интенсивности одного события A215C. После фотообесцвечивания акцептора (≈38,5 с) интенсивность доноров практически не изменяется (увеличение в 1,07 ± 0,05 раза). Для этого графика концентрация АТФ составляла 50 мкМ.

Для дальнейшего подтверждения наличия FRET и определения временной шкалы флуктуаций FRET мы проанализировали временные следы флуоресценции, используя методы корреляции (15), аналогичные флуоресцентной корреляционной спектроскопии (19).Автокорреляция интенсивности флуоресценции с запаздыванием по времени τ пропорциональна вероятности обнаружения фотона в момент времени t + τ, после того, как он уже был обнаружен при t . Автокорреляция, рассчитанная на основе временной кривой донорной флуоресценции одного события T324C, в диапазоне от 0,1 до 1000 мс (рис. 3 A ), имеет два вклада (15): ( i ) гауссиан с полушириной ≈ 250 мс, что отражает время прохождения через конфокальное пятно, и ( ii ) экспоненциальный спад в миллисекундном масштабе.Чтобы проверить, связан ли этот быстрый компонент с FRET, мы рассчитали взаимную корреляцию между донорными и акцепторными сигналами. Взаимная корреляция (рис. 3 B ) показывает те же два вклада, но быстрый имеет отрицательную амплитуду. Эта отрицательная амплитуда указывает на то, что быстрые флуктуации антикоррелированы в донорном и акцепторном сигналах, что является явным признаком FRET (20). Аналогичная примерно миллисекундная компонента FRET наблюдалась в кросс- и автокорреляциях S43C, но не A215C и S149C (рис.3 и рис. S2).

Рис. 3.

Флуктуации интенсивности в миллисекундах из-за FRET наблюдаются для T324C, а не для A215C. Концентрация АТФ: 2 мМ. ( A ) Автокорреляция кривой времени интенсивности флуоресценции донора «пучка шейки крышки» на фиг. 2 A (T324C). Показано соответствие (красная кривая) данных по формуле. 2 , состоящий из гауссовой (прохождение через конфокальное пятно) и экспоненциальной (FRET) составляющей. Компонент FRET имеет амплитуду A , равную 0.22 ± 0,01 и время затухания T _FRET 2,5 ± 0,3 мс. ( B ) Взаимная корреляция временных следов интенсивности донора и акцептора одного и того же события T324C. Спад корреляции, связанный с FRET, имеет амплитуду -0,20 ± 0,01 и время затухания 3,6 ± 0,6 мс. ( C ) Автокорреляция кривой интенсивности флуоресценции во времени события A215C на фиг. 2 D . Никакого спада автокорреляции на приблизительной шкале времени в миллисекундах невозможно различить. ( D ) Взаимная корреляция временных следов интенсивности донора и акцептора одного и того же события A215C. На приблизительной шкале времени в миллисекундах не наблюдается ослабления корреляции, что указывает на отсутствие флуктуаций из-за изменений в FRET.

Для дальнейшего количественного анализа мы сосредоточимся только на автокорреляциях доноров, поскольку флуктуации донорского сигнала являются прямой мерой эффективности FRET, на которую не влияют перекрестные помехи между донором и акцептором (21). Кривые взаимной корреляции использовались только в качестве дополнительной проверки качества: ни одно из использованных событий не показало положительной взаимной корреляции в масштабе времени приблизительно миллисекунды.Подгонка автокорреляций T324C ( n = 16, всего ≈500 шагов; см. Рис. S3 для дополнительных кривых) с уравнением. 2 дала амплитуду 0,18 ± 0,02 (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) и время затухания 2,4 ± 0,4 мс для экспоненциального вклада FRET. Среднее время шага составило 15,0 ± 1,6 мс, как было получено с помощью гауссовой аппроксимации временных кривых (15). Для S43C ( n = 19) мы нашли амплитуду 0,17 ± 0,02, время затухания 2,5 ± 0,3 мс и время шага 12,1 ± 0,7 мс (см.рис.S4 для дополнительных кривых). Время затухания вклада FRET существенно короче, чем время шага, что указывает на то, что переключение между различными состояниями FRET происходит в пределах одного шага. Кинетическая модель требуется для преобразования амплитуд и времен затухания в эффективности FRET и время жизни отдельных состояний. В простейшей кинетической схеме с двумя состояниями кинезин переключается из состояния без FRET с обоими моторными доменами, связанными с MT, в состояние FRET и обратно, завершая шаг 8 нм. Используя эту модель (ур. 3 в материалах и методах ), мы вычисляем, что кинезин T324C (S43C) переключается между состоянием без FRET с временем жизни 12 ± 2 мс (7,9 ± 0,8 мс) и состоянием FRET со временем жизни 3,0 ± 0,9 мс ( 3,7 ± 0,6 мс) и эффективность FRET 0,88 ± 0,12 (0,69 ± 0,06). Эти значения указывают на то, что шаговый цикл кинезина включает пока неразрешенное промежуточное состояние с обоими моторными доменами в непосредственной близости, продолжающееся ≈3 мс при насыщающей концентрации АТФ.

Затем мы определили, как сигналы FRET кинезина S43C и T324C зависят от концентрации АТФ.По графикам интенсивности во времени мы рассчитали кажущуюся эффективность FRET и наблюдали, что она увеличивается с уменьшением концентрации АТФ для обеих конструкций (рис. S5), что согласуется с более ранними результатами для аналогичной конструкции 324 (9). Мы рассчитали автокорреляции донорных сигналов, подогнали их (рис. S3 и S4) и рассчитали времена жизни и эффективности FRET, используя кинетическую схему с двумя состояниями. Обратите внимание, что для расчета срока службы и эффективности FRET из этой модели время шага двигателя требуется в качестве входного параметра (таблица S1): это не полная химио-механическая модель, которая также описывает зависимость скорости от концентрации АТФ.При использовании этого подхода время жизни как FRET, так и состояния без FRET изменяется с концентрацией АТФ (Таблица S1). Связывание АТФ ограничивает скорость при низких концентрациях (22), и можно было бы ожидать, что время жизни только одного из состояний зависит от АТФ. Это противоречие указывает на то, что хемо-механическая модель, включающая зависимость скоростей от концентрации АТФ, должна быть более сложной и включать дополнительные состояния. Наши данные изначально зашумлены из-за ограниченного числа обнаруженных фотонов.Более сложные модели создают несколько проблем: их автокорреляции во многих случаях более сложны, чем одинарная экспонента (23), и требуются дополнительные свободные параметры. Чтобы обойти эти проблемы, мы рассмотрели ограниченную циклическую химико-механическую модель с тремя состояниями (см. Материалы и методы ) с двумя состояниями, идентичными модели с двумя состояниями, использованной выше: состояние без FRET, с обоими моторными доменами MT -связанное и состояние FRET, промежуточное. Третье состояние имеет время жизни, зависящее от АТФ, рассчитанное с использованием кинетики Михаэлиса-Ментен (уравнение. 4 в Материалы и методы ). Это состояние является состоянием ожидания АТФ, описанным в справочниках. 9 и 14. При 2 мМ АТФ его время жизни пренебрежимо мало, и модель сводится к двум состояниям. Только эффективность FRET этого состояния была свободным параметром. Время жизни и эффективность FRET двух других состояний были взяты из моделирования двух состояний (при насыщении АТФ) и оставались постоянными. Автокорреляции были рассчитаны по временным графикам, созданным с использованием моделирования Монте-Карло, с использованием одной экспоненты (рис.S6), и полученные времена и амплитуды затухания сравнивались с экспериментально полученными. Хорошее описание экспериментально полученных параметров было достигнуто с использованием эффективности FRET 0,6 ± 0,1 (0,40 ± 0,15) для состояния ожидания АТФ T324C (S43C) (фиг. 4 и фиг. S7). Обратите внимание, что моделирование с эффективностью FRET состояния ожидания АТФ, равной эффективности состояния с высоким FRET или без FRET, несовместимо с нашими экспериментальными данными, указывая на то, что АТФ-зависимое состояние является отдельным состоянием, структурно отличным от состояния без FRET. -FRET и состояния с высоким FRET.Взятые вместе, наши данные и анализ показывают, что шаг кинезина при различных концентрациях АТФ можно описать с помощью модели с тремя состояниями, с ( i ) состоянием без FRET со временем жизни ≈12 мс, ( ii ) средой. -FRET состояние с ATP-зависимым временем жизни и ( iii ) состояние с высоким FRET со временем жизни ≈3 мс.

Рис. 4.

Модель с тремя состояниями описывает АТФ-зависимость сигналов FRET кинезина T324C. Амплитуды ( A ) и времена затухания ( B ) автокорреляционного затухания FRET.Символы представляют значения, полученные из автокорреляций измеренных временных кривых [среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 16 (2 мМ АТФ), 9 (50 мкМ АТФ), 5 (20 мкМ АТФ)]. Линии представляют моделирование методом Монте-Карло с пятью различными значениями эффективности FRET состояния ожидания АТФ ( E _{FRET ATP} ). Все остальные параметры оставались неизменными ( T _{NO FRET} = 12,0 мс, E _{NO FRET} = 0, T _{HIGH FRET} = 3. 0 мс, E _{HIGH FRET} = 0,88, K _M = 19 мкМ).

Обсуждение

Как эти три состояния вписываются в химико-механический цикл кинезина? Автокорреляционный анализ инвариантен к порядку состояний. Однако мы полагаем, что промежуточное состояние с высоким FRET ≈3 мс следует за связыванием АТФ с безнуклеотидным моторным доменом и предшествует высвобождению АДФ из другого моторного домена, поскольку его время жизни соответствует времени высвобождения АДФ после погони за АТФ. (3.3 мс) (24). Кроме того, широко распространено мнение, что за связыванием АТФ следует быстрое изменение до «закрытой» конформации, обеспечивающее гидролиз (25, 26) и стыковку шейного линкера (27). Новое сформированное состояние может соответствовать наблюдаемому нами промежуточному продукту с высоким FRET. Это промежуточное состояние [3] (рис. 5) сопровождается смещением вперед и прикреплением несвязанного моторного домена к MT, высвобождая ADP. В результирующем состоянии [1], когда оба моторных домена связаны с МТ, длительностью ≈12 мс, АТФ гидролизуется и фосфат высвобождается из конечного моторного домена. Затем мотор находится в состоянии ожидания АТФ [2] со средней эффективностью FRET, указывая на то, что только один моторный домен тесно связан с МТ, что согласуется с некоторыми более ранними исследованиями (9, 14). Кроме того, промежуточное значение FRET предполагает, что связанный с АДФ моторный домен чередуется между конфигурациями [1] и [3], или что он привязан и может свободно перемещаться в пределах нескольких нанометров. В этом состоянии гибкость АДФ-связанного моторного домена может быть относительно большой, поскольку оба шейных линкера, которые вместе образуют связь между моторными доменами, скорее всего, отсоединены (27, 28).На основе наших результатов мы не можем различить, когда привязанный моторный домен находится в довольно фиксированном, промежуточном положении или является подвижным. Недавние исследования с использованием поляризации флуоресценции одной молекулы (29) и оптического захвата микросферы, прикрепленной непосредственно к одному из моторных доменов (30), предоставили доказательства гибкости привязанного моторного домена. Затем, после связывания АТФ, шейный линкер плотно связанного с МТ моторного домена стыкуется с последующим образованием пучка покров-шейка, притягивая АДФ-связанный моторный домен ближе и возвращаясь в состояние с высоким FRET [3] (27 , 31).Мы наблюдали FRET только с использованием кинезина, меченного в положениях 324 и 43, а не 149 и 215. Это открытие предполагает, что в состоянии с высоким FRET [3] только один моторный домен связан с МТ, а другой ориентирован. и транслируется таким образом, что расстояния 324–324 и 43–43 короче ≈4.5 нм, тогда как расстояния 149–149 и 215–215 больше ≈6 нм ( SI Text ). Эти ограничения по расстоянию выполняются конфигурациями, в которых оба основания шейного линкера относительно близко друг к другу, а фронты моторных доменов направлены друг от друга (рис.S8). Эффективность FRET в состоянии [3] выше, чем в состоянии ожидания АТФ [2], что указывает на то, что в среднем моторные домены расположены ближе друг к другу, что согласуется с шейным линкером АТФ-связанного моторного домена, который стыкуется, укорачивая связь между обоими моторными доменами (27, 31).

Рис. 5.

Химио-механическая интерпретация модели трех состояний. В состоянии no-FRET [1] оба моторных домена прочно связаны с MT и находятся на расстоянии 8 нм друг от друга. АТФ гидролизуется, и фосфат высвобождается из конечного моторного домена, что приводит к состоянию ожидания АТФ [2] с промежуточной эффективностью FRET, когда один моторный домен тесно связан, а другой связан.Последующее связывание АТФ с передним двигательным доменом вызывает стыковку его шейного линкера, перемещая хвост кинезина на 8 нм вперед, что приводит к промежуточному состоянию с высоким FRET [3]. В этом состоянии только один моторный домен связан с МТ, а другой близок, так что может возникнуть FRET. После этого промежуточного состояния несвязанный моторный домен (голубой) движется вперед к следующей стороне связывания на МТ, высвобождая АДФ. Указаны времена жизни ( T ) и эффективность FRET ( E _FRET ) конструкции T324C.

В широкопольных исследованиях флуоресценции одиночных молекул, использующих нанометровую локализацию индивидуального моторного домена (5, 7), не удалось выявить ступенчатые промежуточные соединения, скорее всего, из-за ограниченного разрешения по времени. В недавнем широкомасштабном исследовании FRET одной пары с использованием конструкций, аналогичных нашей (9), было показано, что в состоянии ожидания АТФ только один моторный домен связан с МТ, а другой находится в пределах расстояния FRET, что согласуется с наши результаты. Однако этому исследованию не хватало временного разрешения для разрешения наблюдаемого здесь состояния FRET с высотой 3 мс.Они утверждали, что при высоких концентрациях АТФ кинезин совершает быстрые переходы из одного состояния, связанного с двумя моторными доменами, в другое без промежуточных звеньев. Напротив, наши данные показывают, что при насыщающих концентрациях АТФ кинезин проводит значительное количество времени (20-30%) в состоянии, связанном с одним моторным доменом (см. Ниже). Мы предпочитаем модель, в которой при всех концентрациях АТФ связывание АТФ с ведущим моторным доменом может происходить только после того, как замыкающий, связанный с АДФ моторный домен высвобождается из МТ, высвобождая напряжение между моторными доменами (8). После связывания АТФ связанный с АДФ моторный домен остается свободным от МТ в течение 3 мс перед связыванием со следующим сайтом связывания.

В отличие от наших данных, в экспериментах по оптическому улавливанию не наблюдались подэтапы, измеряющие смещение микросферы, прикрепленной к хвосту кинезина, с временным разрешением 50 мкс (11, 32). Это кажущееся противоречие может указывать на то, что переходы в расположении моторных доменов не во всех случаях приводят к движению моторного хвоста. Наши данные не предоставляют прямых доказательств различения между 8-нм шагом кинезинового хвоста, происходящим после высвобождения АДФ (от [3] до [1]) или сразу после связывания АТФ (от [2] до [3]).Однако сильная поддержка последней точки зрения была предоставлена ​​в других исследованиях (8, 27, 32). Кроме того, недавнее моделирование молекулярной динамики показало, что за связыванием АТФ следует стыковка шейного линкера и последующее образование β-цепи с участием остатков шейного линкера и N-концевой покрывающей цепи (связка покров-шейка) (33). . Эксперименты по оптическому захвату подтвердили идею о том, что степпинг кинезина обеспечивается за счет образования этого пучка покров-шейка (29). Такой механизм со смещением на 8 нм, индуцированным АТФ-управляемым крупномасштабным конформационным изменением, согласуется с нашими выводами.В заключение, одномоторные эксперименты FRET, основанные на конфокальной флуоресцентной микроскопии, предоставили нам наблюдаемый параметр и временное разрешение, чтобы различить до сих пор скрытый промежуточный продукт в шаговом цикле Kinesin-1. Эта промежуточная конфигурация может играть ключевую роль в направлении домена шагового двигателя вперед, к плюсовому концу MT, к следующему сайту связывания.

Материалы и методы

Одномолекулярные эксперименты.

Были приготовлены четыре гомодимерных кинезиновых конструкции с одним цистеином, начиная с бесцистеиновой (cys, преобразованной в ala), повсеместно распространенной конструкции кинезина человека длиной 560 аминокислотных остатков (15). Цистеины были введены в положения 324, 43, 215 и 149 (Энтелехон), что подтверждено секвенированием. Кинезины экспрессировали, очищали и метили с пятикратным избытком как Alexa555, так и Alexa647 (Invitrogen), как описано в ссылке. 15. Экспериментальная установка и анализ (15) были модифицированы для одновременного обнаружения донорной и акцепторной флуоресценции. После прохождения через дихроичное зеркало 550DCLP (Chroma) флуоресценция была разделена на два канала вторым дихроичным зеркалом 645DCXR (Chroma) и отфильтрована эмиссионными фильтрами HQ575 / 50 или HQ675 / 50 (Chroma).Вместо 4 мМ DTT мы использовали 5 мМ TROLOX (Sigma – Aldrich) в смеси образцов и не добавляли таксол. Система регенерации АТФ использовалась при всех концентрациях АТФ (15, 34).

Анализ данных.

Временные кривые интенсивности флуоресценции (с временными интервалами 10 мс) одиночных кинезинов, проходящих через конфокальное пятно, были подогнаны к гауссиану для получения амплитуды, ширины и смещения. Данные были ограничены фоновым сигналом ≈100 мс по обе стороны от события для подгонки и дальнейшего анализа.Подобранное смещение (темновые подсчеты и фоновая флуоресценция) использовалось для коррекции фона, а амплитуды донорных и акцепторных каналов использовались для выбора событий, в которых присутствовали обе метки. Кроме того, в анализ включались события, в которых сигнал пропадал из-за обесцвечивания или отслоения, только когда они пересекали более половины конфокального объема. Для них применялись те же критерии, за исключением того, что не учитывались интенсивности флуоресценции после отслоения или фотообесцвечивания.Скорректированные по фону следы интенсивности флуоресценции донора, x _i , и акцептора, x _j , были объединены при Δ t = 0,1 мс и были перекрестными ( i ≠ j ) и автокоррелированным ( i = j ) с использованием: где N обозначает общее количество интервалов времени события. Кросс- и автокорреляции, полученные с использованием уравнения. 1 не нормализуются и затухают до нуля при больших временах запаздывания.Полученные таким образом корреляции были дополнены: где T _FRET — постоянная затухания, а A — относительная амплитуда затухания из-за FRET, N — амплитуда корреляции, α — коэффициент, описывающий ширину нашего конфокального объема [мы зафиксировали до α = 760 (= 4 * σ _пятно )], и T _step — среднее время шага. Термин, включающий T _T , является эмпирическим термином, добавленным для коррекции искажений от идеальной гауссовой формы временных следов из-за обесцвечивания фотографий, приземления, отслоения и стохастической природы шага (15).Все корреляционные кривые были нормализованы путем деления значений корреляции на амплитуду, N . Обратите внимание, что здесь мы перешли на непрерывную переменную времени задержки τ. При заданных условиях значения времени затухания ( T _FRET ) и амплитуды ( A ) вклада FRET, полученные из подгонок к автокорреляциям, были усреднены. Эти средние значения были использованы для дальнейшего анализа с использованием модели с двумя и тремя состояниями (см. Ниже).

Автокорреляция стохастической кинетической схемы с двумя состояниями.

Теоретическое описание автокорреляции модели, в которой интенсивность флуоресценции донора циклически меняется между состоянием без FRET (NF) и состоянием с FRET (F), дается следующими уравнениями [заимствовано из Torres et al. (20)]: где k _NF и k _F — скорости выхода из состояния без FRET и FRET соответственно, E _F — эффективность FRET состояния FRET, k _шаг — скорость шага, а T _step — среднее время шага проходящего двигателя.Здесь эффективность FRET состояния без FRET, E _NF , установлена ​​на ноль. В наших экспериментах мы ожидали состояния с обоими моторными доменами, связанными с МТ и разделенными на 8 нм. Мы подсчитали, что для такого состояния ожидается эффективность FRET 3c ).

Расчет параметров модели с двумя состояниями на основе экспериментальных автокорреляций.

Из среднего времени затухания ( T _FRET ) и амплитуды ( A ), полученных из подгонок к экспериментальным автокорреляциям, скорости и эффективности FRET были рассчитаны с использованием уравнения. 3 а — в . Таким образом были получены два набора решений. Два раствора различаются по их усредненным по времени относительным интенсивностям доноров. «Правильный» раствор был выбран после сравнения относительных донорных интенсивностей двух растворов с экспериментально полученными значениями. Экспериментальные значения были определены путем деления средней донорной интенсивности событий, связанных с кинезинами, меченными как донором, так и акцептором, на интенсивность событий, связанных с кинезинами, меченными только одним донором.

Моделирование Монте-Карло зависимости сигналов FRET от АТФ с использованием циклической трехуровневой химико-механической модели.

Мы предположили циклическую модель с тремя состояниями без обратных реакций. Чтобы ограничить количество свободных параметров, мы зафиксировали время пребывания и интенсивности двух состояний на значениях, полученных с помощью модели двух состояний при концентрациях 2 мМ АТФ.Мы позволили времени жизни третьего состояния варьироваться в зависимости от концентрации АТФ (так, чтобы его время жизни было незначительным при 2 мМ АТФ), и оставили только эффективность FRET этого состояния ожидания АТФ в качестве свободного параметра. Время жизни состояния ожидания АТФ, T _{Ожидание АТФ} , было получено из следующей производной уравнения Михаэлиса-Ментен: где k _cat — максимальная скорость шага двигателя, K _M — концентрация, при которой двигатель движется с половинной скоростью, а [ ATP ] — концентрация АТФ. Константа Михаэлиса ( K _M = 19 ± 8 мкМ) была получена из подбора комбинированных средних скоростей обеих конструкций (T324C и S43C).

Используя эту модель, мы построили временные кривые интенсивности доноров с помощью программного обеспечения для моделирования, написанного в LabVIEW (National Instruments), на основе подхода Монте-Карло. Как правило, моделировалось 15 000 циклов. Следы были получены для 20 концентраций АТФ и различной эффективности FRET в состоянии ожидания АТФ.По смоделированным временным графикам были рассчитаны автокорреляции, которые были аппроксимированы экспоненциальной функцией, дающей амплитуду и время затухания.

Благодарности

Эта работа была поддержана стипендией Види Исследовательского совета по наукам о Земле и о жизни и является частью исследовательской программы Stichting voor Fundamenteel Onderzoek der Materie, которая финансируется Nederlandse Organisatie voor Wetenschappelijk Onderzoek.

Сноски

• ² Кому следует направлять корреспонденцию. Эл. Почта: erwinp {at} nat.vu.nl

• Вклад авторов: E.J.G.P. спланированное исследование; С.В. и З.Л. проведенное исследование; С.В. и З.Л. проанализированные данные; и S.V., Z.L. и E.J.G.P. написал газету.

• Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

• Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.

• Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте pnas.org/cgi/content/full/07106/DCSupplemental.

Одномолекулярная динамика FRET молекулярных моторов в ловушке ABEL

https: // doi.org / 10.1016 / j.ymeth.2021.01.012Получить права и контент

Основные моменты

•

Объединяет перенос энергии резонанса Фёрстера одиночной молекулой с ограничением молекул.

•

Антиброуновское электрокинетическое улавливание обеспечивает время наблюдения до 6 с.

•

Наблюдает события конформационного переключения молекулярного двигателя Rep с разрешением по времени 1 мс.

•

Моделирование электрического потенциала в микросхеме микрофлюидики.

•

Скрытый марковский анализ траекторий резонансной энергии Фёрстера одиночных молекул.

Abstract

Одномолекулярный резонансный перенос энергии Ферстера (smFRET) молекулярных моторов обеспечивает трансформирующее понимание их динамики и конформационных изменений одновременно с высоким временным и пространственным разрешением. Однако ключевой задачей таких исследований FRET является наблюдение молекулы в действии достаточно долго, не ограничивая ее естественную функцию.Антиброуновская электрокинетическая ловушка (ловушка ABEL) предназначена для комбинирования smFRET с ограничением молекул, чтобы обеспечить время наблюдения до нескольких секунд, устраняя при этом любое требование привязанного поверхностного прикрепления рассматриваемой молекулы. Кроме того, присущая ловушке ABEL способность избирательно захватывать активные молекулы FRET ускоряет процесс сбора данных. В этой работе мы проиллюстрируем возможности ловушки ABEL в выполнении измерений smFRET в расширенном временном масштабе на молекулярном двигателе Rep, что имеет решающее значение для удаления белковых блоков перед прогрессирующим механизмом репликации ДНК и для перезапуска застопорившейся репликации ДНК.Мы можем контролировать отдельные молекулы Rep в течение 6 секунд с временным разрешением менее миллисекунды, фиксируя множественные события конформационного переключения в течение времени наблюдения. Здесь мы предоставляем пошаговое руководство по рациональному проектированию, созданию и реализации ловушки ABEL для smFRET обнаружения Rep in vitro . Мы включаем подробную информацию о том, как моделировать электрический потенциал в месте ловушки, и использовать скрытый марковский анализ траекторий smFRET.

Ключевые слова

Ловушка ABEL

Одномолекулярный FRET

Rep

Электрокинетический захват

Скрытое моделирование Маркова

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Полный текст

© 2021 Elsevier Inc. Все права защищены.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Немецкие поставщики автомобильных запчастей обеспокоены поэтапным отказом от двигателей внутреннего сгорания — Eurasia Review

Николаус Дж. Курмайер

(EurActiv) — Пакет Европейской комиссии Fit for 55 быстро ужесточит стандарты выбросов для автомобилей, фактически запретив продажу автомобилей с двигателями внутреннего сгорания к 2035 году. Немецкие автопроизводители упредили этот шаг, но поставщики запчастей и сотрудники обеспокоены.

«Это враждебно по отношению к инновациям и противоположно нейтральному с точки зрения технологий», — сказала Хильдегард Мюллер, президент влиятельной немецкой ассоциации производителей автомобилей VDA, добавив, что влияние на рабочие места в отрасли будет значительным.

Ее реакция на предложение Комиссии выявляет различные интересы, которым обязано VDA: с одной стороны, такие компании, как Volkswagen, которые собирают автомобили, с другой — интересы поставщиков запчастей и двигателей, таких как Bosch.

Volkswagen выбрал электромобили и пообещал прекратить продажу двигателей внутреннего сгорания в Европе к 2035 году. «Наше электрическое наступление набирает обороты», — сказал 29 июля генеральный директор Герберт Дисс, когда VW сообщил о прибыли, превышающей ожидания.

Картина менее радужна для крупных поставщиков запчастей Германии, которые чувствуют себя недостаточно представленными в политическом дискурсе из-за доминирования гигантов автомобилестроения, сообщил источник EURACTIV на условиях анонимности.

Конец двигателя внутреннего сгорания означает конец десятилетий технологического опыта и процессов, накопленных узкоспециализированными поставщиками, многие из которых являются малыми и средними предприятиями, как предупреждают недавние отчеты.

Профсоюзы, рабочие советы тоже хотят сказать

Раскол между сборщиками автомобилей и поставщиками запчастей усугубляется беспокойством их сотрудников. В 2020 году в отчете Немецкой национальной платформы будущего мобильности (NPM) был предсказан наихудший сценарий, при котором автомобильная промышленность потеряет 400 000 рабочих мест, что побудило профсоюзы потребовать голоса в том, как должна происходить трансформация.

Отчет вызывает много споров, и большинство экспертов сходятся во мнении, что в этом случае потеря рабочих мест будет не так уж и плоха.Ассоциация машиностроителей VMDA прогнозировала потерю 180 000 рабочих мест, если двигатель внутреннего сгорания будет запрещен в 2040 году.

«В настоящее время вырисовывается несколько небольших Детройтов», — предупредил Роман Зитцельсбергер, региональный руководитель профсоюза металлистов IG Metall в интервью Kontext, и добавил, что поставщики, сосредоточенные в нескольких местах, теперь сталкиваются с радикальными сокращениями с возможно катастрофическими результатами для регионы.

Йорг Хоффманн, председатель IG Metall, в интервью 7 июня привел в пример западногерманский штат Саар.Он отметил, что в регионе есть четыре крупных поставщика, работающих в области двигателей внутреннего сгорания: Bosch, ZF, Eberspächter и Festo, и все они потеряют большие убытки из-за прекращения эксплуатации двигателей внутреннего сгорания.

Эти кластеры должны адаптироваться к меняющимся обстоятельствам и сотрудничать, например, путем создания регионального кластера топливных элементов, добавил он.

Производственные советы, которые представляют интересы сотрудников внутри компании и в тандеме с профсоюзами, также имеют право голоса при переходе автомобильной промышленности Германии.

На них возложена законодательно закрепленная роль в переобучении сотрудников, поскольку их приобретенные навыки устаревают из-за поэтапного отказа от двигателей внутреннего сгорания. IG Metall призвала к созданию фонда для помощи советам предприятий малого и среднего бизнеса, чтобы облегчить их роль в его позиционном документе «Fit for 55».

Трансформация автомобильной промышленности Германии идет гораздо глубже, чем энтузиазм Volkswagen в отношении электромобильности, и поставщики обеспокоены тем, что их крупнейший источник дохода скоро исчезнет.

немецких поставщиков автомобильных запчастей обеспокоены отказом от двигателей внутреннего сгорания — EURACTIV.

com

Пакет Европейской комиссии Fit for 55 быстро ужесточит стандарты выбросов для автомобилей, фактически запретив продажу автомобилей с двигателями внутреннего сгорания к 2035 году. Немецкие автопроизводители упредили этот шаг, но поставщики запчастей и сотрудники обеспокоены.

«Это враждебно по отношению к инновациям и противоположно нейтральному с точки зрения технологий», — сказала Хильдегард Мюллер, президент влиятельной немецкой ассоциации производителей автомобилей VDA, добавив, что влияние на рабочие места в отрасли будет значительным.

Ее реакция на предложение Комиссии выявляет различные интересы, которым обязано VDA: с одной стороны, такие компании, как Volkswagen, которые собирают автомобили, с другой — интересы поставщиков запчастей и двигателей, таких как Bosch.

Volkswagen выбрал электромобили и пообещал прекратить продажу двигателей внутреннего сгорания в Европе к 2035 году. «Наше электрическое наступление набирает обороты», — сказал 29 июля генеральный директор Герберт Дисс, когда VW сообщил о прибыли, превышающей ожидания.

Картина менее радужна для крупных поставщиков запчастей Германии, которые чувствуют себя недостаточно представленными в политическом дискурсе из-за доминирования гигантов автомобилестроения, сообщил источник EURACTIV на условиях анонимности.

Конец двигателя внутреннего сгорания означает конец десятилетий технологического опыта и процессов, накопленных узкоспециализированными поставщиками, многие из которых являются малыми и средними предприятиями, как предупреждают недавние отчеты.

Профсоюзы, рабочие советы тоже хотят сказать

Раскол между сборщиками автомобилей и поставщиками запчастей усугубляется беспокойством их сотрудников.В 2020 году в отчете Немецкой национальной платформы будущего мобильности (NPM) был предсказан наихудший сценарий, при котором автомобильная промышленность потеряет 400 000 рабочих мест, что побудило профсоюзы потребовать голоса в том, как должна происходить трансформация.

Отчет вызывает много споров, и большинство экспертов сходятся во мнении, что в этом случае потеря рабочих мест будет не так уж и плоха. Ассоциация машиностроителей VMDA прогнозировала потерю 180 000 рабочих мест, если двигатель внутреннего сгорания будет запрещен в 2040 году.

«В настоящее время вырисовывается несколько более мелких Детройтов», — предупредил Роман Зитцельсбергер, региональный руководитель профсоюза металлистов IG Metall в интервью Kontext, и добавил, что поставщики, сосредоточенные в нескольких местах, теперь сталкиваются с радикальными сокращениями с возможно катастрофическими результатами для регионы.

Йорг Хоффманн, председатель IG Metall, в интервью 7 июня привел в пример западногерманский штат Саар. Он отметил, что в регионе есть четыре крупных поставщика, работающих в области двигателей внутреннего сгорания: Bosch, ZF, Eberspächter и Festo, и все они потеряют большие убытки из-за прекращения эксплуатации двигателей внутреннего сгорания.

Эти кластеры должны адаптироваться к меняющимся обстоятельствам и сотрудничать, например, путем создания регионального кластера топливных элементов, добавил он.

Производственные советы, которые представляют интересы сотрудников внутри компании и в тандеме с профсоюзами, также имеют право голоса при переходе автомобильной промышленности Германии.

На них возложена законодательно закрепленная роль в переобучении сотрудников, поскольку их приобретенные навыки устаревают из-за поэтапного отказа от двигателей внутреннего сгорания. IG Metall призвала к созданию фонда для помощи советам предприятий малого и среднего бизнеса, чтобы облегчить их роль в его позиционном документе «Fit for 55».

Трансформация автомобильной промышленности Германии идет гораздо глубже, чем энтузиазм Volkswagen в отношении электромобильности, и поставщики обеспокоены тем, что их крупнейший источник дохода скоро исчезнет.

[под редакцией Джози Ле Блонд]

0 Уголь Лад шасси двигателя

Состояние:

Новый: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый, неповрежденный предмет (включая предметы ручной работы). Посмотреть продавца листинг для получения полной информации. … Подробнее о состоянии

Измерять:

009

New RCA T-120 5 Pack VHS Пустые видеокассеты с возможностью записи 6 часов 7

05764 Новые женские кожаные сандалии Giulia Palai и женские кожаные сандалии Marvel Premier Captain America 2019 от Мэтью Лопеса Sketch & nbsp Совершенно новый клиновой ремень DAYCO 10 мм x 1425 мм 10A1425C Вспомогательный привод вентилятора Альтернатор & nbsp Anachrony Time Capsule Органайзер настольной игры Игра не используется & nbsp ‘Shark’ Retro Style Yo-Yo (YY00023198) & nbsp Металлический солдат, неуверенный в деталях & nbsp TAHE Fitoxil Treatment Forte Classic Concentrate 6 X 0.Мужские сандалии на плоской подошве с тиснением в виде звезд с тиснением в виде звезд с тиснением в виде медвежьей лапы George Mens 4XL из вискозы 4XL Обувь на плоской подошве с тиснением Maddie Green 7 среднего размера (B, M) BHFO 8744 840627147647 Подлинная минифигурка Lego — Дик Грейсон — Минифигурка LEGO Batman — 402 House & nbsp Полотенца ручной работы Масштаб 1:12 — розовая пара NEW & nbsp 4XJAZZAB GOLD EDITION NICE FRAGRANCE AMBER CEDAR EDP PERFUME 50ML BY AL ZAAFARAN & nbsp HVAC резистор-резистор вентилятора HVAC UAC SW 11346C & nbsp YARDLEY Lily of the Valley 3 x 100 YARDLEY Lily of The Valley Soap — ПОЧТОВЫЙ МАГАЗИН: 1991 VINTAGE EDITION Toy Boxed & nbsp Firstline FBJ5242 Шаровая опора спереди, слева, снизу, справа & nbsp GW Citadel Warhammer Fantasy Empire Helblitzen [Halberdier] — неокрашенные x2 Женские тонкие всплывающие стринги Havaianas с логотипом — Macaron Pink Размер: 39 / 40 & nbsp Белый зимний плюшевый мишка Gund с летучей мышью и шарфом 44461 высотой 18 дюймов

0 Лад шасси угольного двигателя

0 Лад шасси угольного двигателя

Игрушки и хобби

2022 Toyota Land Cruiser Параметры двигателя просочились, но нет V8

Согласно последним данным LC300, мировая премьера состоится в конце этого месяца или 1 июня, поэтому неудивительно, что утечки усиливаются. После вчерашней массовой утечки информации о GR Sport и некоторых технологиях, доступных внутри, пикантный раздел технических характеристик каким-то образом ускользнул из Интернета за несколько недель до премьеры.

Люди, создавшие аккаунт land.cruiser.300 в Instagram, получили таблицу, показывающую два двигателя, которые Toyota будет предлагать при запуске. Без лишних слов, 3,5-литровый бензиновый агрегат V6 с турбонаддувом будет выдавать 409 лошадиных сил (305 киловатт) при 5200 об / мин и 480 фунт-фут (650 Нм) крутящего момента в диапазоне от 2000 до 3600 об / мин.

Благодаря использованию принудительной индукции, он превосходит безнаддувный 5,7-литровый двигатель предыдущей модели. В LC200 максимальная мощность двигателя V8 составляет 381 л.с. и 401 фунт-фут (544 Нм) крутящего момента, что значительно позже в диапазоне оборотов, при 5600 и 3600 об / мин соответственно. В то же время двигатель с турбонаддувом должен оказаться значительно более экономичным, чем жаждущий NA V8.

Что касается другой трансмиссии, это 3,3-литровый дизельный V6 мощностью 302 л.с. (225 кВт) при 4000 об / мин и здоровые 516 фунт-фут (700 Нм) в диапазоне от 1600 до 2600 об / мин.В таблице также показано увеличение мощности (+30 кВт и +50 Нм) по сравнению со старым дизельным двигателем, 4,5-литровым двигателем V8 с двумя турбинами.

Смерть V8 не стала большой неожиданностью, поскольку уже больше года ходят сообщения о новом турбодвигателе V6, который может заменить его. Тем не менее, патент Toyota от сентября 2020 года намекнул на новый твин-турбо V8, возможно, для моделей Lexus. В феврале 2020 года инсайдер Toyota сообщил нам, что двигатель будет устанавливаться в моделях по цене

долларов и выше, причем LC-F получит его первым в 2022 году.

Хотя Land Cruiser V8 с двойным турбонаддувом был бы хорош, мы бы не стали задерживать дыхание. Серебряная подкладка в том, что эти новые бензиновые и дизельные двигатели V6 наносят серьезный удар по более старым более крупным агрегатам, при этом, вероятно, обеспечивают лучшую топливную экономичность и большую мощность на низких оборотах.

Обратный словарь

Как вы, наверное, заметили, слова, обозначающие термин, перечислены выше. Надеюсь, сгенерированный список слов для слова «термин» выше соответствует вашим потребностям. Если нет, вы можете попробовать «Связанные слова» — еще один мой проект, в котором используется другая техника (хотя он лучше всего работает с отдельными словами, а не с фразами).

О реверсивном словаре

Обратный словарь работает довольно просто. Он просто просматривает тонны словарных определений и выбирает те, которые наиболее точно соответствуют вашему поисковому запросу. Например, если вы наберете что-то вроде «тоска по прошлому», то движок вернет «ностальгия». На данный момент движок проиндексировал несколько миллионов определений, и на данном этапе он начинает давать стабильно хорошие результаты (хотя иногда может возвращать странные результаты).Он во многом похож на тезаурус, за исключением того, что позволяет искать по определению, а не по отдельному слову. Так что в некотором смысле этот инструмент является «поисковой машиной по словам» или конвертером предложений в слова.

Я создал этот инструмент после работы над «Связанные слова», который очень похож на инструмент, за исключением того, что он использует набор алгоритмов и несколько баз данных для поиска слов, похожих на поисковый запрос. Этот проект ближе к тезаурусу в том смысле, что он возвращает синонимы для запроса слова (или короткой фразы), но также возвращает множество широко связанных слов, которые не включены в тезаурус.Таким образом, этот проект, Reverse Dictionary, должен идти рука об руку с Related Words, чтобы действовать как набор инструментов для поиска слов и мозгового штурма. Для тех, кто заинтересован, я также разработал «Описывающие слова», которые помогут вам найти прилагательные и интересные дескрипторы для вещей (например, волн, закатов, деревьев и т. Д.).

Если вы не заметили, вы можете щелкнуть слово в результатах поиска, и вам будет представлено определение этого слова (если доступно). Определения взяты из известной базы данных WordNet с открытым исходным кодом, поэтому огромное спасибо многим участникам за создание такого потрясающего бесплатного ресурса.

Особая благодарность разработчикам открытого кода, который использовался в этом проекте: Elastic Search, @HubSpot, WordNet и @mongodb.

Обратите внимание, что Reverse Dictionary использует сторонние скрипты (такие как Google Analytics и рекламные объявления), которые используют файлы cookie. Чтобы узнать больше, см. Политику конфиденциальности.

.